作者：幸世峰，孙理华，骆小梅

单位：

新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市，新疆医科大学第五附属医院心血管内科

关键词：

动脉粥样硬化；三磷酸腺苷结合盒转运体A1；微小RNA-146a；NF-κB

CLC：

R 543.5

DOI：

10.12114/j.issn.1008-5971.2021.00.110

Funds：

摘要：

背景　抑制巨噬细胞脂质蓄积（泡沫化）和炎症因子释放是防治动脉粥样硬化（AS）的重要途径。 微小RNA（miR）-146a 是否通过三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）等膜蛋白以三磷酸腺苷（ATP）为能源将细 胞内游离胆固醇转运到细胞膜表面，进而减少细胞内胆固醇蓄积尚未知。目的　探讨微小RNA（miR）-146a 是否通 过靶向沉默ABCA1 调控THP-1 巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出。方法　本次实验时间为2018 年12 月—2020 年6 月。培养THP-1 细胞（人单核细胞株）并经佛波酯（PMA）诱导分化为巨噬细胞，其吞噬脂质形成巨噬细胞源性泡 沫细胞。将巨噬细胞源性泡沫细胞分为空白对照组，培养液中不加任何其他试剂；阳性对照组，培养液中加入肝X 受 体激动剂T0901317；阴性对照组，培养液中加入ABCA1 小干扰RNA（siRNA）；模拟物组，培养液中加入miR-146a mimics；抑制剂组，培养液中加入miR-146a inhibits；采用液体闪烁计数法检测胆固醇流出效率。将巨噬细胞源性泡 沫细胞分别接种到6 孔板并培养至生长对数期，按照要求分别加入In-NC（NC 组）、miR-146a mimics（模拟物组）、 miR-146a inhibits（抑制剂组）、miR-146a mimics+ 核因子κB（NF-κB）抑制剂（模拟物+PDTC 组）、miR-146 anhibits+NF-κB 抑制剂（抑制剂+PDTC 组），分别采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-PCR）和Western blotting 法检测NF-κB 通路 p50、p65 及ABCA1 的mRNA、蛋白相对表达量。将巨噬细胞源性泡沫细胞接种于培养瓶内，汇 合度达到80% 后分别转染miR-146a mimics（模拟物组）、miR-146a inhibits（抑制剂组）及In-NC（NC 组），采用 Annexin V-FITC/PI 双染流式细胞术检测正常细胞、坏死细胞及凋亡细胞水平。采用荧光素酶报告基因检测miR-146a 与ABCA1 结合情况。结果　阳性对照组胆固醇流出效率高于空白对照组，阴性对照组和模拟物组胆固醇流出效率低 于阳性对照组，抑制剂组胆固醇流出效率高于空白对照组、阴性对照组和模拟物组（P ＜ 0.05）。模拟物组正常细胞 水平低于NC 组，抑制剂组正常细胞水平高于NC 组和模拟物组（P ＜ 0.05）；模拟物组坏死细胞、晚期凋亡细胞、 早期凋亡细胞水平高于NC组，抑制剂组坏死细胞、晚期凋亡细胞、早期凋亡细胞水平低于NC组和模拟物组（P ＜ 0.05）。 模拟物组NF-κB 通路p50、p65 的mRNA、蛋白相对表达量高于NC 组，ABCA1 的mRNA、蛋白相对表达量低于NC 组（P ＜ 0.05）；模拟物+PDTC 组NF-κB 通路p50、p65 的mRNA、蛋白相对表达量低于模拟物组，ABCA1 的 mRNA、蛋白相对表达量高于模拟物组（P ＜ 0.05）。抑制剂组NF-κB 通路p50、p65 的mRNA、蛋白相对表达量低 于NC 组，ABCA1 的mRNA、蛋白相对表达量高于NC 组（P ＜ 0.05）；抑制剂+PDTC 组NF-κB 通路p50、p65 的 mRNA、蛋白相对表达量高于抑制剂组，ABCA1 的mRNA、蛋白相对表达量低于抑制剂组（P ＜ 0.05）。SDM2+miR- 146a 组和SDM1/SMD2+miR-146a 组ABCA1 3'UTR 活性与WT+Con-miR 组比较，差异无统计学意义（P ＞ 0.05）。结 论　miR-146a 可通过抑制ABCA1 表达而抑制巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出，从而导致AS 发生发展，而NF-κB 可以减轻miR-146a 对ABCA1 表达的抑制作用。

ReferenceList：