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2021 年5 期 第29 卷

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微小RNA-146a 靶向沉默三磷酸腺苷结合盒转运体A1 调控THP-1 巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出

作者:幸世峰,孙理华,骆小梅

单位:
新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市,新疆医科大学第五附属医院心血管内科
关键词:
动脉粥样硬化;三磷酸腺苷结合盒转运体A1;微小RNA-146a;NF-κB
中图分类号:
R 543.5
DOI:
10.12114/j.issn.1008-5971.2021.00.110
基金项目:

摘要:

背景 抑制巨噬细胞脂质蓄积(泡沫化)和炎症因子释放是防治动脉粥样硬化(AS)的重要途径。 微小RNA(miR)-146a 是否通过三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)等膜蛋白以三磷酸腺苷(ATP)为能源将细 胞内游离胆固醇转运到细胞膜表面,进而减少细胞内胆固醇蓄积尚未知。目的 探讨微小RNA(miR)-146a 是否通 过靶向沉默ABCA1 调控THP-1 巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出。方法 本次实验时间为2018 年12 月—2020 年6 月。培养THP-1 细胞(人单核细胞株)并经佛波酯(PMA)诱导分化为巨噬细胞,其吞噬脂质形成巨噬细胞源性泡 沫细胞。将巨噬细胞源性泡沫细胞分为空白对照组,培养液中不加任何其他试剂;阳性对照组,培养液中加入肝X 受 体激动剂T0901317;阴性对照组,培养液中加入ABCA1 小干扰RNA(siRNA);模拟物组,培养液中加入miR-146a mimics;抑制剂组,培养液中加入miR-146a inhibits;采用液体闪烁计数法检测胆固醇流出效率。将巨噬细胞源性泡 沫细胞分别接种到6 孔板并培养至生长对数期,按照要求分别加入In-NC(NC 组)、miR-146a mimics(模拟物组)、 miR-146a inhibits(抑制剂组)、miR-146a mimics+ 核因子κB(NF-κB)抑制剂(模拟物+PDTC 组)、miR-146 anhibits+NF-κB 抑制剂(抑制剂+PDTC 组),分别采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western blotting 法检测NF-κB 通路 p50、p65 及ABCA1 的mRNA、蛋白相对表达量。将巨噬细胞源性泡沫细胞接种于培养瓶内,汇 合度达到80% 后分别转染miR-146a mimics(模拟物组)、miR-146a inhibits(抑制剂组)及In-NC(NC 组),采用 Annexin V-FITC/PI 双染流式细胞术检测正常细胞、坏死细胞及凋亡细胞水平。采用荧光素酶报告基因检测miR-146a 与ABCA1 结合情况。结果 阳性对照组胆固醇流出效率高于空白对照组,阴性对照组和模拟物组胆固醇流出效率低 于阳性对照组,抑制剂组胆固醇流出效率高于空白对照组、阴性对照组和模拟物组(P < 0.05)。模拟物组正常细胞 水平低于NC 组,抑制剂组正常细胞水平高于NC 组和模拟物组(P < 0.05);模拟物组坏死细胞、晚期凋亡细胞、 早期凋亡细胞水平高于NC组,抑制剂组坏死细胞、晚期凋亡细胞、早期凋亡细胞水平低于NC组和模拟物组(P < 0.05)。 模拟物组NF-κB 通路p50、p65 的mRNA、蛋白相对表达量高于NC 组,ABCA1 的mRNA、蛋白相对表达量低于NC 组(P < 0.05);模拟物+PDTC 组NF-κB 通路p50、p65 的mRNA、蛋白相对表达量低于模拟物组,ABCA1 的 mRNA、蛋白相对表达量高于模拟物组(P < 0.05)。抑制剂组NF-κB 通路p50、p65 的mRNA、蛋白相对表达量低 于NC 组,ABCA1 的mRNA、蛋白相对表达量高于NC 组(P < 0.05);抑制剂+PDTC 组NF-κB 通路p50、p65 的 mRNA、蛋白相对表达量高于抑制剂组,ABCA1 的mRNA、蛋白相对表达量低于抑制剂组(P < 0.05)。SDM2+miR- 146a 组和SDM1/SMD2+miR-146a 组ABCA1 3'UTR 活性与WT+Con-miR 组比较,差异无统计学意义(P > 0.05)。结 论 miR-146a 可通过抑制ABCA1 表达而抑制巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出,从而导致AS 发生发展,而NF-κB 可以减轻miR-146a 对ABCA1 表达的抑制作用。

参考文献: