作者：廖思聪,祁春雷,王大新

单位：

1.中南大学湘雅二医院心内科2.江苏省苏北人民医院心内科

关键词：

动脉粥样硬化; 肌细胞,平滑肌; 细胞凋亡; 普伐他汀; 香烟提取物;

CLC：

DOI：

Funds：

摘要：

目的探讨普伐他汀预处理对香烟提取物(CSE)诱导的小鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的影响及可能机制。方法 2017年6月—2018年1月,采用负压吸引装置抽吸香烟烟雾并经过滤除菌制备CSE原液,取10代以内生长状态良好的对数期VSMCs进行实验。(1)将实验细胞分为不同浓度CSE诱导组,其中空白组使用不含CSE的DMEM培养基培养12 h,低浓度组、中浓度组、高浓度组分别于含1%、5%、10%CSE的DMEM培养基培养12 h。(2)将实验细胞分为不同剂量普伐他汀预处理组,其中对照组使用不含普伐他汀的DMEM培养基培养12 h;低剂量组、中剂量组、高剂量组分别给予1μM、10μM、100μM普伐他汀预处理2 h,然后使用含5%CSE的DMEM培养基培养12 h;部分实验设置阳性对照组,阳性对照组给予4-苯丁酸(4-PBA)2 m M预处理2 h,然后使用含5%CSE的DMEM培养基培养12 h。采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测Bcl-2、Bax、GRP78、Chop m RNA相对表达量,采用Western Blot检测Bcl-2、Bax、GRP78、Chop蛋白相对表达量。结果 (1)低浓度组、中浓度组和高浓度组细胞凋亡率高于空白组,中浓度组和高浓度组细胞凋亡率高于低浓度组,高浓度组细胞凋亡率高于中浓度组(P<0.05)。(2)低浓度组、中浓度组和高浓度组Bcl-2 m RNA和蛋白相对表达量低于空白组,中浓度组和高浓度组Bcl-2 m RNA和蛋白相对表达量低于低浓度组,高浓度组Bcl-2蛋白相对表达量低于中浓度组(P<0.05);低浓度组、中浓度组和高浓度组Bax m RNA和蛋白相对表达量高于空白组,中浓度组和高浓度组Bax m RNA和蛋白相对表达量高于低浓度组,高浓度组Bax m RNA相对表达量高于中浓度组(P<0.05)。(3)低浓度组、中浓度组、高浓度组GRP78、Chop m RNA和蛋白相对表达量高于空白组,中浓度组、高浓度组GRP78、Chop m RNA和蛋白相对表达量高于低浓度组,高浓度组GRP78 m RNA、Chop蛋白相对表达量高于中浓度组(P<0.05)。(4)低剂量组、中剂量组、高剂量组细胞凋亡率低于对照组,中剂量组细胞凋亡率低于低剂量组和高剂量组(P<0.05)。(5)低剂量组、中剂量组、高剂量组Bcl-2蛋白相对表达量高于对照组,Bax蛋白相对表达量低于对照组(P<0.05);中剂量组Bax蛋白相对表达量低于低剂量组和高剂量组(P<0.05)。(6)阳性对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组GRP78和Chop蛋白相对表达量低于对照组,低剂量组、中剂量组、高剂量组GRP78蛋白相对表达量低于阳性对照组,中剂量组GRP78蛋白相对表达量低于低剂量组、Chop蛋白相对表达量低于阳性对照组(P<0.05)。结论 CSE可诱导小鼠VSMCs凋亡,且呈浓度依赖性;普伐他汀预处理对CSE诱导的小鼠VSMCs凋亡具有一定保护作用,其中10μM普伐他汀预处理的抗细胞凋亡作用最佳,其机制可能与调控内质网应激信号途径有关。

ReferenceList：