作者：陈宏谋,郑捷敏,闫宪磊,刘全,黎耀,肖振勇,陈家康

单位：

广西医科大学第四附属医院神经外科

关键词：

催乳素瘤; 溴隐亭; 血管内皮生长因子类;

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摘要：

目的探讨溴隐亭对垂体泌乳素腺瘤血管形成的影响及其分子作用机制。方法 2014年1月—2015年6月,体外培养MMQ细胞株并进行MTT比色实验,共设置6个实验组、1个对照组和1个空白组,实验组在培养基和细胞悬液中添加不同浓度(0.125、0.250、0.500、1.000、2.000、4.000μg/ml)溴隐亭,分别记为0.125μg/ml组、0.250μg/ml组、0.500μg/ml组、1.000μg/ml组、2.000μg/ml组、4.000μg/ml组,对照组加入等体积的培养基及细胞悬液,空白组仅加入等体积的培养基;根据半数抑制浓度(IC50)筛选最适浓度溴隐亭进行后续试验。再采用最适浓度的溴隐亭处理MMQ细胞48 h,制备条件培养液(CM),各实验组在培养基和细胞悬液基础上分别加入最适溶度的溴隐亭和CM,对照组加入等体积的培养基和细胞悬液,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测泌乳素(PRL)浓度及其变化率。用携带GFP基因的慢病毒(LV-GFP)感染人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)制备HUVEC/LV-GFP,用CM孵育HUVEC/LV-GFP细胞,各实验组在培养基和细胞悬液基础上分别加入最适浓度的溴隐亭和CM,CM组在培养基和细胞悬液基础上仅加入CM,1.000μg/ml组在培养基和细胞悬液基础上仅加入1.000μg/ml溴隐亭,对照组加入等体积培养基和细胞悬液;24 h后在荧光显微镜下观察血管样结构形成情况并计数。采用Western blotting法检测对照组与最适浓度溴隐亭组垂体瘤转化基因(PTTG)和血管内皮生长因子(VEGF)表达情况。结果 6个实验组MMQ细胞增殖抑制率时间与组间存在交互作用(P<0.05);培养48 h、72 h 0.125μg/ml组、0.250μg/ml组、0.500μg/ml组、1.000μg/ml组、2.000μg/ml组、4.000μg/ml组MMQ细胞增殖抑制率高于培养24 h,培养72 h 0.125μg/ml组、0.250μg/ml组、0.500μg/ml组、1.000μg/ml组、2.000μg/ml组MMQ细胞增殖抑制率高于培养48 h(P<0.05);而培养48 h与培养72 h 4.000μg/ml组MMQ细胞增殖抑制率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。通过软件计算抑制MMQ细胞增殖的IC50接近0.500μg/ml,遂选用0.250、0.500、1.000μg/ml溴隐亭进行后续实验。1.000μg/ml+CM组PRL浓度及变化率均低于0.500μg/ml+CM组、0.250μg/ml+CM组和对照组;0.500μg/ml+CM组PRL浓度及变化率均低于0.250μg/ml+CM组和对照组;0.250μg/ml+CM组PRL浓度及变化率均低于对照组(P<0.05)。CM组MMQ细胞外血管样结构计数多于0.250μg/ml+CM组、0.500μg/ml+CM组、1.000μg/ml+CM组、1.000μg/ml组、对照组;0.250μg/ml+CM组MMQ细胞外血管样结构计数多于0.500μg/ml+CM组、1.000μg/ml+CM组、1.000μg/ml组、对照组;0.500μg/ml+CM组MMQ细胞外血管样结构计数多于1.000μg/ml+CM组、1.000μg/ml组、对照组;1.000μg/ml+CM组MMQ细胞外血管样结构计数多于1.000μg/ml组、对照组;1.000μg/ml组与对照组MMQ细胞外血管样结构计数比较,差异无统计学意义(P>0.05)。对照组PTTG、VEGF表达水平高于0.250μg/ml组、0.500μg/ml组、1.000μg/ml组,0.250μg/ml组PTTG、VEGF表达水平高于0.500μg/ml组、1.000μg/ml组,0.500μg/ml组PTTG、VEGF表达水平高于1.000μg/ml组(P<0.05)。结论溴隐亭可通过抑制垂体泌乳素腺瘤的血管形成而抑制其生长与侵袭,而这种抑制作用与下调PTTG/VEGF信号通路有关。

参考文献：